Monkeypox Virus Real Time PCR Kit

1. MintaGyűjtemény:A mintát steril csövekbe kell gyűjteni ennek megfelelően

szabványos műszaki előírásokkal.

2. Reagens előkészítés (reagens előkészítési terület)

Vegye ki a készlet alkatrészeit, és szobahőmérsékleten egyensúlyozza ki őket készenléti használatra.

3. Mintafeldolgozás (mintafeldolgozási terület)

3.1 Nukleinsav extrakció

A nukleinsav extrakcióhoz 200 μL folyékony minták, pozitív kontroll és negatív kontroll vétele javasolt, a vírus DNS extrakciós kitekre vonatkozó követelményeknek és eljárásoknak megfelelően.

3.2 Liofilizált por feloldása és sablon hozzáadása

Készítsen Monkeypox Virus liofilizált premixet a minták számának megfelelően.Egy mintához egy liofilizált premix port tartalmazó PCR cső szükséges.A negatív és a pozitív kontrollt két mintaként kell kezelni.

(1) Adjon 15 μL feloldó oldatot minden liofilizált premixet tartalmazó PCR-csőbe, majd adjon 5 μL extrahált mintát/negatív kontrollt/pozitív kontrollt mindegyik PCR-csőbe.

(2) Fedje le szorosan a PCR-csöveket, pöccintse meg kézzel a PCR-csöveket, amíg a liofilizált por teljesen fel nem oldódik és összekeveredett, majd azonnali kis sebességű centrifugálással gyűjtse össze a folyadékot a PCR-csövek aljára.

(3) Ha általános valós idejű PCR-műszert használ a kimutatáshoz, akkor közvetlenül vigye át a PCR csöveket az amplifikációs területre;Ha a detektáláshoz BTK-8-at használ, akkor a következő műveleteket kell végrehajtania: 10 μL folyadékot vigyen át a PCR csőből a BTK-8 reakcióchip üregébe.Egy PCR-cső a chipen lévő egy lyuknak felel meg.A pipettázás során ügyeljen arra, hogy a pipetta függőlegesen 90 fokkal álljon.Az aeroszolzáró pipettahegyeket mérsékelt erővel kell a mélyedés közepére helyezni, és abba kell hagyni a pipetta nyomását, amikor eléri az első fokozatot (a buborékok elkerülése érdekében).A lyukak feltöltése után vegyen ki egy reakcióchip membránt, hogy az összes lyukat befedje, majd a chipet átvisszük az amplifikáció detektálási területére.

4. PCR-amplifikáció (kimutatási terület)

4.1 Helyezze a PCR csöveket/reakcióchipet a reakciótartályba, és állítsa be az egyes reakciólyukak nevét a megfelelő sorrendben.

4.2 A kimutatási fluoreszcencia beállításai: (1) Monkeypox virus (FAM);(2) Belső ellenőrzés (CY5).

4.3 Futtassa a következő kerékpározási protokollt

ABI7500, Bio-Rad CFX96, SLAN-96S, QuantStudio protokoll:

 A BTK-8 protokollja:

5. Az eredmények elemzése (lásd a műszer használati útmutatóját)

A reakció után az eredmények automatikusan mentésre kerülnek.Kattintson az „Elemzés” elemre az elemzéshez, és a műszer automatikusan értelmezi minden egyes minta Ct értékét az eredmény oszlopban.A negatív és pozitív kontrolleredményeknek meg kell felelniük a következő "6. Minőségellenőrzés" pontnak.

6. Minőség ellenőrzés

6.1 Negatív kontroll: Nincs Ct vagy Ct>40 a FAM csatornában, Ct≤40 a CY5 csatornában normál erősítési görbével.

6.2 Pozitív kontroll: Ct≤35 a FAM csatornában normál erősítési görbével, Ct≤40 a CY5 csatornában normál erősítési görbével.

6.3 Az eredmény akkor érvényes, ha a fenti kritériumok mindegyike teljesül.Ellenkező esetben az eredmény érvénytelen.

Eredmény értelmezése

A következő eredmények lehetségesek:

JEGYZET: Ha érvénytelen eredmény adódik, a mintát össze kell gyűjteni és újra meg kell vizsgálni.